24 聚合物固定相：既可作為固體固定相，也可作為載體，又稱高分子多孔微球。物質在其表面既存在吸附作用，又存在溶解作用。(1)具有較大的比表面積，表面孔徑均勻(2)對非極性及極性物質無有害的吸附活性，拖尾現象小，極性組分也能出對稱峰(3)由于不存在液膜，無流失現象，熱穩(wěn)定性好(4)機械強度和耐腐蝕性較好，系均勻球形，在填充柱色譜中均勻性、重現性好，有助于減少渦流擴散。

25 載氣種類的選擇：檢測器的適應性;載氣流速的大小。

26 柱溫的選擇：

(1)首先應使柱溫控制在固定液的最高使用溫度(超過該溫度固定液易流失)和最低使用溫度(低于此溫度固定液以固體形式存在)范圍之內。

(2)提高柱溫，可以改善傳質阻力，有利于提高柱效，縮短分析時間，但降低了容量因子和選擇性，不利于分離。一般的原則是：在使最難分離的組分盡可能分離的前提下，盡量采用較低的柱溫，但以保留時間適宜，峰形不拖尾為度。

(3)柱溫一般選擇在接近或略低于組分平均沸點時的溫度。

(4)組分復雜，沸程寬的試樣，采用程序升溫。

27 載體和固定液含量的選擇：配比：固定液在載體上的涂漬量，一般指的是固定液與擔體的百分比，填充柱的配比通常在5%～25%之間。配比越低，擔體上形成的液膜越薄，傳質阻力越小，柱效越高，分析速度也越快。配比較低時，固定相的負載量低，允許的進樣量較小。分析工作中通常傾向于使用較低的配比。

28 進樣條件的選擇：進樣量應控制在柱容量允許范圍及檢測器線性檢測范圍之內。進樣要求動作快、時間短;氣化室一般較柱溫高30~70°C。

29 提高色譜分離能力的途徑：(1)塔板理論：增加柱長，減小柱徑，即增加柱子塔板數;(2)速率理論：減小組分在柱中的渦流擴散和傳質阻力，可降低塔板高度。

30 毛細管色譜柱的結構特點：

(1) 不裝填料阻力小，長度可達百米的毛細管柱，管徑0.2mm。:

(2)氣流單途徑通過柱子，消除了組分在柱中的渦流擴散。

(3)固定液直接涂在管壁上，總柱內壁面積較大,涂層很薄，則氣相和液相傳質阻力大大降低。

(4)毛細管色譜柱柱效高達每米3000～4000塊理論塔板，一支長度100米的毛細管柱，總的理論塔板數可達104～106。

31、毛細管色譜具有以下優(yōu)點：

(1)分離效率高：比填充柱高10～100倍;

(2)分析速度快：用毛細管色譜分析比用填充柱色譜速度

(3)色譜峰窄、峰形對稱。較多采用程序升溫方式;

(4)靈敏度高，一般采用氫焰檢測器。

(5)渦流擴散為零。

32、毛細管色譜的類型：

(1)涂壁毛細管柱：將固定液直接涂敷在管內壁上。柱制作相對簡單，但柱制備的重現性差、壽命短。

(2)多孔層毛細管柱：在管壁上涂敷一層多孔性吸附劑固體微粒。構成毛細管氣固色譜。

(3)載體涂漬毛細管柱：將非常細的擔體微粒粘接在管壁上，再涂固定液。柱效較涂壁毛細管柱高。

(4)化學鍵合或交聯(lián)毛細管柱：將固定液通過化學反應鍵合在管壁上或交聯(lián)在一起。使柱效和柱壽命進一步提高。

高效液相色譜法（HPLC）

1 與氣相色譜相比液相色譜的優(yōu)點 ：與氣相色譜法相比，液相色譜法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性及相對分子質量的限制，只要求把樣品制成溶液即可，非常適合于分離生物大分子、離子型化合物，不穩(wěn)定的天然產物以及其他各種高分子化合物等。此外，液相色譜的流動相不僅起到使樣品沿色譜柱移動的作用，而且與固定相一樣，與樣品分子發(fā)生選擇性的相互作用，這就為控制和改善分離條件提供了一個額外的可變因素。而氣相色譜法采用的流動相是惰性氣體，對組分沒有親和力，僅起運載作用。

2 液相色譜特點 ：高壓、高速、高效、高靈敏度、高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效分離分析方法。

3 高效液相相色譜儀的組成 ：高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數據處理系統(tǒng)。

4 流動相使用前必須脫氣。常用的脫氣方法有 ：低壓脫氣法(電磁攪拌、水泵抽空，可同時加熱或向溶劑吹氮氣)、吹氦氣脫氣法和超聲波脫氣法等。

5 梯度洗脫 ：用兩種(或多種)不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相中溶劑的配比和極性，通過流動相中極性的變化來改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。

6 高壓梯度(內梯度)：特點是先加壓后混合。將溶劑用高壓泵增壓以后輸入色譜系統(tǒng)的梯度混合室，加以混合后送入色譜柱。

  低壓梯度(外梯度) ：特點是先混合后加壓。在常壓下預先按一定的程序將溶劑混合后再用泵輸入色譜柱。

7 進樣系統(tǒng) 要求 ：良好的密封性，最小的死體積，最好的穩(wěn)定性，進樣時對色譜系統(tǒng)壓力、流量影響較小。